Praktische opdracht amylase

Amylase komt dagelijks bij iedereen voor. Maar wat is de invloed van bijvoorbeeld keukenzout op de werking van dit enzym?

Onderzoeksvraag

Wat is de invloed van keukenzout (NaCl) op de werking van het enzym amylase?

Hypothese

De invloed van keukenzout (NaCl) zorgt voor een remming van de werking van het enzym amylase.

Voorspelling

Als de invloed van keukenzout (NaCl) voor een remmende werking van het enzym amylase veroorzaakt, dan zal zetmeel langzamer afbreken met keukenzout (NaCl), dan zonder keukenzout (NaCl).

Materiaal

Druppelplaatjes
Reageerbuizen
Reageerbuisrek
Joodoplossing
Gedestilleerd water
Zetmeeloplossing (2%)
Amylase-oplossing (1%)
Pipet (5 mL&10mL)
Druppelpipet
Stopwatch
Waterbad 20 °C
Keukenzout (NaCl)
Erlenmeyer
Weegschaal
Stift
Maatkolf
Bekerglas
Buffer pH=6,5

Methode

PILOT (HET BEPALEN VAN DE VERHOUDING ZETMEEL:AMYLASE)
Neem 6 druppelplaten en nummer deze 1 tot en met 6, met behulp van een stift. Zorg ervoor dat er verticaal 6 holtes en horizontaal 12 holtes zijn. Met behulp van een druppelpipet vul je alle holtes met 2 druppels Joodoplossing.

Neem 6 reageerbuizen en nummer deze met de nummers 1 tot en met 6. Doe ze in een reageerbuisrekje. In elk van de zes reageerbuizen gaat er 4,0 mL gedestilleerd water en 2,0 mL buffer (pH = 6,5), bij een pH van 6,5 is de werking van amylase optimaal. Dit doe je met behulp van een pipet. In totaal moet er in elk reageerbuisje 10 mL oplossing zitten. Omdat er gekozen is voor 4,0 mL gedestilleerd water en 2,0 mL buffer, blijft er nog 4 mL over. Varieer de hoeveelheid amylase-oplossing en zetmeeloplossing. (Zie Tabel 1)

Voordat er wordt begonnen met het uitvoeren, moeten alle oplossingen (amylase en zetmeel) op kamertemperatuur zijn. Dit kan bijvoorbeeld gedaan worden met behulp van een waterbad van 20 °C.

Reageerbuisje	1	2	3	4	5	6
2% Zetmeel oplossing (mL)	3,5	3,0	2,5	2,0	1,5	1,0
1% Amylase oplossing (mL)	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5	3,0
Gedestilleerd water (mL)	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0	4,0
Buffer (pH=6, 5)	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0

Pipetteer eerst de bijbehorende hoeveelheid zetmeeloplossing bij het bijbehorende reageerbuisje. Neem nu 6 nieuwe reageerbuizen en nummer deze 1 tot en met 6. Hier pipetteer je de bijbehorende hoeveelheid amylase-oplossing bij het bijbehorende buisje. Start nu de stopwatch, zorg ervoor dat in de eerste minuut de amylase-oplossing toegevoegd is bij de reageerbuizen. Zorg ervoor dat de oplossingen goed gehomogeniseerd zijn. Druppel met behulp van een druppelpipet elke minuut 2 druppels van de oplossing bij de bijbehorende druppelplaat. Noteer elke minuut de waarnemingen. Ga door tot er geen blauw/blauwe stippels te zien is.

RESULTATEN PILOT

Bij reageerbuisje 1 was er na 16 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
Bij reageerbuisje 2 was er na 14 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
Bij reageerbuisje 3 was er na 7 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
Bij reageerbuisje 4 was er na 5 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
Bij reageerbuisje 5 was er na 3 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
Bij reageerbuisje 6 was er na 1 minuut geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.

CONCLUSIE PILOT
Uit de resultaten kun je concluderen dat de verhouding van reageerbuisje 3 het beste is, namelijk 2,5 mL 2% zetmeeloplossing en 1,5 1% amylase-oplossing. Dit gaan wij gebruiken bij onze proef met keukenzout (NaCl).

METHODE PROEF
Neem 6 druppelplaten en nummer deze 1 tot en met 6, met behulp van een stift. Zorg ervoor dat er verticaal 6 holtes en horizontaal 12 holtes zijn. Met behulp van een druppelpipet vul je alle holtes met 2 druppels Joodoplossing.

Neem zes reageerbuizen en nummer deze met de nummers 1 tot en met 6. Doe ze in een reageerbuisrekje. Uit het pilot proef is gebleken dat de verhouding 2,5 mL 2% zetmeeloplossing en 1,5 1% amylase-oplossing de beste verhouding is. Nu variëren we de hoeveelheid keukenzout (NaCl) en gedestilleerd water. Weeg 10 gram keukenzout af in een bekerglas van 100 mL op een weegschaal. Giet het keukenzout in een maatkolf en doe er 100 mL water bij. Homogeniseer de oplossing goed. Dit is een 10% NaCl-oplossing. Door water toe te voegen worden het verschillende concentraties van NaCl.

Voordat er wordt begonnen met het uitvoeren, moeten alle oplossingen (amylase en zetmeel) op kamertemperatuur zijn. Dit kan bijvoorbeeld gedaan worden met behulp van een waterbad van 20 °C.

Reageerbuisje	1	2	3	4	5	6
NaCl- oplossing (mL)	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5	3,0
2% Zetmeel oplossing (mL)	2,5	2,5	2,5	2,5	2,5	2,5
1% Amylase oplossing (mL)	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5	1,5
Gedestilleerd water (mL)	3,5	3,0	2,5	2,0	1,5	1,0
Buffer (pH=6, 5)	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0
Percentage NaCl (%)	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5	3,0

Pipetteer eerst de bijbehorende hoeveelheid zetmeel-oplossing, gedestilleerd water, buffer en NaCl-oplossing bij het bijbehorende reageerbuisje. Neem nu 6 nieuwe reageerbuizen en nummer deze 1 tot en met 6. Hier pipetteer je de bijbehorende hoeveelheid amylase-oplossing bij het bijbehorende buisje. Start nu de stopwatch, zorg ervoor dat in de eerste minuut de amylase-oplossing toegevoegd is bij de reageerbuizen. Zorg ervoor dat de oplossingen goed gehomogeniseerd zijn. Druppel met behulp van een druppelpipet elke minuut 2 druppels van de oplossing bij de bijbehorende druppelplaat. Noteer elke minuut de waarnemingen. Ga door tot er geen blauw/blauwe stippels te zien is.

Resultaten

Pilot:

Tijd (minuten)	Kleur
1	Donkerblauw/zwart
2	Donkerblauw/zwart
3	Donkerblauw/bruin
4	Donkerbruin
5	Bruin
6	Geel/lichtbruin
7	Geel/lichtbruin
8	Geel
9	Geel
10	Geel
11	Geel
12	Geel

Proef:

Tijd (minuten)	Kleur buis 1	Kleur buis 2	Kleur buis 3	Kleur buis 4	Kleur buis 5	Kleur buis 6
1	Donkerbruin	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart
2	Geel	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart	Donkerpaars / zwart	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart
3	Donkerblauw	Donkerblauw	Donkerblauw / zwart	Donkerbruin	Donkerblauw / zwart	Donkerblauw / zwart
4	Donkerblauw / zwart	Geel	Donkerblauw / zwart	Geel	Donkerblauw	Bruin
5	Donkerbruin / zwart	Donkerbruin / zwart	Donkerbruin / zwart	Donkerblauw / zwart	Donkerbruin	Donkerbruin
6	Donkerbruin	Bruin	Lichtbruin	Donkerbruin	Lichtbruin	Lichtbruin
7	Lichtbruin	Geel	Geel	Lichtbruin	Geel	Geel
8	Geel	Geel	Geel	Geel	Geel	Geel

Conclusie

Keukenzout (NaCl) heeft geen invloed op de werking van het enzym amylase. De hypothese (De invloed van keukenzout (NaCl) zorgt voor een remming van de werking van het enzym amylase.) was dus onjuist.