Praktische opdracht amylase

Onderzoeksvraag
Wat is de invloed van keukenzout (NaCl) op de werking van het enzym amylase?Hypothese
De invloed van keukenzout (NaCl) zorgt voor een remming van de werking van het enzym amylase.Voorspelling
Als de invloed van keukenzout (NaCl) voor een remmende werking van het enzym amylase veroorzaakt, dan zal zetmeel langzamer afbreken met keukenzout (NaCl), dan zonder keukenzout (NaCl).Materiaal
- Druppelplaatjes
- Reageerbuizen
- Reageerbuisrek
- Joodoplossing
- Gedestilleerd water
- Zetmeeloplossing (2%)
- Amylase-oplossing (1%)
- Pipet (5 mL&10mL)
- Druppelpipet
- Stopwatch
- Waterbad 20 °C
- Keukenzout (NaCl)
- Erlenmeyer
- Weegschaal
- Stift
- Maatkolf
- Bekerglas
- Buffer pH=6,5
Methode
PILOT (HET BEPALEN VAN DE VERHOUDING ZETMEEL:AMYLASE)Neem 6 druppelplaten en nummer deze 1 tot en met 6, met behulp van een stift. Zorg ervoor dat er verticaal 6 holtes en horizontaal 12 holtes zijn. Met behulp van een druppelpipet vul je alle holtes met 2 druppels Joodoplossing.
Neem 6 reageerbuizen en nummer deze met de nummers 1 tot en met 6. Doe ze in een reageerbuisrekje. In elk van de zes reageerbuizen gaat er 4,0 mL gedestilleerd water en 2,0 mL buffer (pH = 6,5), bij een pH van 6,5 is de werking van amylase optimaal. Dit doe je met behulp van een pipet. In totaal moet er in elk reageerbuisje 10 mL oplossing zitten. Omdat er gekozen is voor 4,0 mL gedestilleerd water en 2,0 mL buffer, blijft er nog 4 mL over. Varieer de hoeveelheid amylase-oplossing en zetmeeloplossing. (Zie Tabel 1)
Voordat er wordt begonnen met het uitvoeren, moeten alle oplossingen (amylase en zetmeel) op kamertemperatuur zijn. Dit kan bijvoorbeeld gedaan worden met behulp van een waterbad van 20 °C.
Reageerbuisje | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
---|---|---|---|---|---|---|
2% Zetmeel oplossing (mL) | 3,5 | 3,0 | 2,5 | 2,0 | 1,5 | 1,0 |
1% Amylase oplossing (mL) | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | 2,5 | 3,0 |
Gedestilleerd water (mL) | 4,0 | 4,0 | 4,0 | 4,0 | 4,0 | 4,0 |
Buffer (pH=6, 5) | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
RESULTATEN PILOT
- Bij reageerbuisje 1 was er na 16 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
- Bij reageerbuisje 2 was er na 14 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
- Bij reageerbuisje 3 was er na 7 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
- Bij reageerbuisje 4 was er na 5 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
- Bij reageerbuisje 5 was er na 3 minuten geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
- Bij reageerbuisje 6 was er na 1 minuut geen kleuromslag meer in de Joodoplossing.
CONCLUSIE PILOT
Uit de resultaten kun je concluderen dat de verhouding van reageerbuisje 3 het beste is, namelijk 2,5 mL 2% zetmeeloplossing en 1,5 1% amylase-oplossing. Dit gaan wij gebruiken bij onze proef met keukenzout (NaCl).
METHODE PROEF
Neem 6 druppelplaten en nummer deze 1 tot en met 6, met behulp van een stift. Zorg ervoor dat er verticaal 6 holtes en horizontaal 12 holtes zijn. Met behulp van een druppelpipet vul je alle holtes met 2 druppels Joodoplossing.
Neem zes reageerbuizen en nummer deze met de nummers 1 tot en met 6. Doe ze in een reageerbuisrekje. Uit het pilot proef is gebleken dat de verhouding 2,5 mL 2% zetmeeloplossing en 1,5 1% amylase-oplossing de beste verhouding is. Nu variëren we de hoeveelheid keukenzout (NaCl) en gedestilleerd water. Weeg 10 gram keukenzout af in een bekerglas van 100 mL op een weegschaal. Giet het keukenzout in een maatkolf en doe er 100 mL water bij. Homogeniseer de oplossing goed. Dit is een 10% NaCl-oplossing. Door water toe te voegen worden het verschillende concentraties van NaCl.
Voordat er wordt begonnen met het uitvoeren, moeten alle oplossingen (amylase en zetmeel) op kamertemperatuur zijn. Dit kan bijvoorbeeld gedaan worden met behulp van een waterbad van 20 °C.
Reageerbuisje | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
---|---|---|---|---|---|---|
NaCl- oplossing (mL) | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | 2,5 | 3,0 |
2% Zetmeel oplossing (mL) | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 | 2,5 |
1% Amylase oplossing (mL) | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 | 1,5 |
Gedestilleerd water (mL) | 3,5 | 3,0 | 2,5 | 2,0 | 1,5 | 1,0 |
Buffer (pH=6, 5) | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
Percentage NaCl (%) | 0,5 | 1,0 | 1,5 | 2,0 | 2,5 | 3,0 |
Resultaten
Pilot:Tijd (minuten) | Kleur |
---|---|
1 | Donkerblauw/zwart |
2 | Donkerblauw/zwart |
3 | Donkerblauw/bruin |
4 | Donkerbruin |
5 | Bruin |
6 | Geel/lichtbruin |
7 | Geel/lichtbruin |
8 | Geel |
9 | Geel |
10 | Geel |
11 | Geel |
12 | Geel |
Tijd (minuten) | Kleur buis 1 | Kleur buis 2 | Kleur buis 3 | Kleur buis 4 | Kleur buis 5 | Kleur buis 6 |
---|---|---|---|---|---|---|
1 | Donkerbruin | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart |
2 | Geel | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart | Donkerpaars / zwart | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart |
3 | Donkerblauw | Donkerblauw | Donkerblauw / zwart | Donkerbruin | Donkerblauw / zwart | Donkerblauw / zwart |
4 | Donkerblauw / zwart | Geel | Donkerblauw / zwart | Geel | Donkerblauw | Bruin |
5 | Donkerbruin / zwart | Donkerbruin / zwart | Donkerbruin / zwart | Donkerblauw / zwart | Donkerbruin | Donkerbruin |
6 | Donkerbruin | Bruin | Lichtbruin | Donkerbruin | Lichtbruin | Lichtbruin |
7 | Lichtbruin | Geel | Geel | Lichtbruin | Geel | Geel |
8 | Geel | Geel | Geel | Geel | Geel | Geel |