Extractie bladgroen

Hoe kun je onderzoeken bij welke golflengte van het licht de componenten chlorofyl a en b het meeste licht absorberen? Dat doe je met behulp van papierchromatografie en spectrofotometrie!

Theorie

• J0 = de intensiteit van de bundel die door de blanco gaat
• J1 = de intensiteit van de bundel die door de oplossing wordt doorgelaten.
• Transmissie = (J1 : J0)
• Absorptie = (J0 - J1):J0
• Extinctie =10log (J0 : J1)

Uitvoering experiment

Doel:
Het onderzoeken bij welke golflengte de componenten chlorofyl A en B het meeste licht absorberen, met behulp van papierchromatografie en de spectofotometrie.

Benodigdheden:

• Gedroogde spinazie (2 uur gedroogd op 80°C)
• Gedroogde klimop (2 uur gedroogd op 80°C)
• Reageerbuisjes
• Extractiemiddel petroleumether/aceton 9:1
• Trechter
• Filtreerpapiertjes
• Papierchromatogram
• Pipetje
• Loopvloeistofpapiertje
• 2 Glazen cilinders
• Aluminiumfolie
• Cuvetten
• Spectrofotometer

Uitvoering:
We wreven de gedroogde spinazie en de gedroogde klimop, ieder apart, in een mortier fijn. Daarna deden we het groene poeder, ieder apart, in een reageerbuis met 5 ml extractiemiddel. We roerden ongeveer een 1 minuut en daarna filtreerden we de mengsels. Het filtraat bewaarden we in het donker, want het mocht niet in aanraking komen met licht. Daarna brachten we op een loopvloeistofpapiertje het extract spinazie aan (10x met een pipetje). Ook brachten we op een loopvloeistofpapiertje het extract klimop aan (10x met een pipetje).

Daarna plaatsten we ze in de glazen cilinders, waar we aluminiumfolie omheen deden, zodat de lichtdicht werden. Na een paar uur wapperden we de papiertjes droog en bepaalden de 4 Rf-waarden, van chlorofyl a, chlorofyl b, b-caroteen en luteïne. Daarna knipten we de vlekjes chlorofyl a en chlorofyl b uit. Die deden we, ieder apart, in een buisje met 5 ml extractiemiddel. We deden de meting van de extinctie met 1 cuvet met blanco oplossing, 1 cuvet met chlorofyl a extract, en 1 cuvet met chlorofyl b extract. We maten om de 10 nm, vanaf 350 nm tot en met de 700 nm, de extinctie.

Meetresultaten

Conclusie

• Bij chlorofyl a ligt λ max. op 430 nm. Bij deze golflengte vindt bij chlorofyl a dus de grootste extinctie plaats.
• Bij chlorofyl b ligt λ max. op 450 nm. Bij deze golflengte vindt bij chlorofyl b dus de grootste extinctie plaats.
• 440 nm is dus ideaal. Hierbij treed bij zowel chlorofyl a als b de bijna hoogst mogelijke extinctie op. En word er dus veel licht geabsorbeerd.
• Hoe hoger de lichtabsorptie is hoe sneller de fotosynthese verloopt.